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    組培消毒常用試劑 無菌及無菌操作!

    優質內容 來源:山東組培試劑公司 時間:2022-03-10 23:16:20 瀏覽:0

          今天我們來講一下組培消毒常用試劑 無菌及無菌操作!組培消毒試劑:次氯酸鈉(22元500ml),甲醛溶液(12元500ml ),高錳酸鉀(22元500g),升汞(350元250g),新潔爾滅(12元500ml),過氧乙酸(28元一對甲溶液乙溶液各500ml) 這些店內都有銷售,需要直接咨詢客服!淘寶店不準銷售,只有這里告訴大家噢!

          一、 滅菌及無菌操作

          植物組織培養成敗的關鍵:保證無菌,避免污染。

          器皿和用具的洗滌(P28):玻璃器皿洗滌方法:先用堿洗,即用肥皂粉刷洗,用清水清洗,晾干。

          難洗的器具:需用鉻酸-硫酸混合洗滌液浸泡,浸泡后用自來水沖洗,最后用蒸餾水沖洗。

          二、 培養基滅菌及培養基、植物材料的消毒

          (一)培養基的滅菌(高壓滅菌)

          一般程序:

          1.按實驗需求配制&hellip;&hellip;

          2.&hellip;&hellip;加水,防止干燒。

          3.將培養基瓶,所用的培養皿,接種用的器具,蒸餾水等需要滅菌的東西放入鍋內。

          4.關上鍋蓋,擰緊。

          5.打開電源,開始加熱,至100℃,3~5min。

          6.滅菌鍋自動關上排氣閥,開始加壓,溫度繼續上升,溫度到達121℃。

          7.維持此溫度,壓力維持0.1~0.2MPa下,保持10-20分鐘。

          8.時間到后自動降壓降溫至100℃,壓力為零。

          9.在94℃時切斷電源,可打開鍋蓋,取出培養基冷卻,滅菌完畢。

          滅菌最少時間:

          mLmin

          20~5015

          75~15020

          250~50025

          100030

          注意事項:①在滅菌之前一定要檢查鍋中的水位,嚴禁干燒,以免造成事故。

         ?、跍缇斑€需檢查排氣閥是否關上。

         ?、壑挥挟斿佒袎毫榱銜r才能打開鍋蓋,否則會有危險。

         ?、苠亙葢粲锌障?,不能太滿。

         ?、轀缇鷷r間不宜過長,也不可以超過滅菌鍋規定的壓力范圍。

          (二)物體表面滅菌

          滅菌方式:噴霧、涂抹殺菌。

          范圍:桌面、墻面、雙手、材料表面。

          消毒劑:70%酒精;1-2%來蘇水;0.25-1%新潔爾滅,洗衣粉;吐溫-80。

          (三)接種工具滅菌

          用前干熱滅菌 160-180℃,1.5-2.0h

          用前濕熱滅菌 121℃,20-30min

          接種前用酒精棉球檫試,侵入95%酒精液中,并在酒精燈上滅菌。

          (四)實驗服、口罩、濾紙滅菌

          濕熱滅菌 121℃,20-30min

          &hellip;&hellip;

          (五)接種室滅菌

          紫外燈照射(接種室、超凈臺、接種箱):波長260nm,距離小于1.2m,2.-30min。

          臭氧滅菌機:1~2h。

          熏蒸滅菌:5-8mL/m3甲醛+5g/m3高錳酸鉀;冰醋酸。

          接種臺噴霧消毒:75%酒精。

          (六)培養室滅菌

          新建培養&hellip;&hellip;

          隔2-5天用洗衣粉水或來蘇水拖地一次,用高錳酸鉀擦。

          三、無菌操作

          滅菌:用物理或化學方法,殺死物體表面積和孔隙內一切微生物或生物體,即所有有生命的物質全部殺死。

          消毒:殺死、  消除或抑制部分微生物,使之不發生作用。

         

    滅菌劑名稱

    使用濃度%

    清洗難易

    滅菌時間

    滅菌效果

    酒精

    70-75

    0.1-3

    Ca(ClO)2

    9&mdash;10

    5&mdash;30

    氯化汞

    0.1-0.2

    較難

    2-10

    最好

         

    常用化學消毒劑:

          酒精滅菌的原理:

          1) 酒精具有較強的穿透能力和殺菌力,它使細菌蛋白質變性。使用的濃度一般為70&mdash;75%。

          2) 處理時間15&mdash;30s,不宜太久,因此細胞容易收縮脫水。它具有浸潤和滅菌雙重作用,適用于表面消毒;

          3) 在乙醇溶液中加入0.1%的酸或堿,可提高殺菌效果。

          植物材料消毒程序:1)清洗(流動自來水沖洗數小時,洗衣粉毛刷等清洗);2)滅菌劑浸泡滅菌;3)無菌水清洗4、5次擦干;4)加表面活性劑(吐溫-20或吐溫-80,加強表面活性劑,磁力攪拌,超聲振蕩)。

          常規二次消毒法:材料先放入70%的乙醇中,約30s后再在0.1%的氯化銀中浸泡,2&mdash;0min,或在2%次氯酸鈉中浸泡20min,然后用無菌水沖洗3、4次。

          四、廣譜實驗法

          在廣譜試驗中,把培養基中所有組分分為4大類:無機鹽、有機物質、生長素、細胞分裂素

          4類物質各3種濃度的自由組合即構成了3項包括81個處理的實驗。

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